¿CÓMO SE DESCONGELAN LOS
EXPLANTES CONSERVADOS?
“La naturaleza está constituida de tal manera que es experimentalmente
imposible determinar sus movimientos absolutos” (Albert Einstein).
Aristolochia es un género de plantas con más
de 500 especies de la familia de las Aristolochiaceae (Scheper, 1998).
DESCONGELACIÓN Y RECULTIVO
Con la técnica E/D, la descongelación se realiza
generalmente a temperatura ambiente,
puesto que las muestras están lo suficientemente deshidratadas antes de la congelación y no hay riesgo de
recristalización del hielo durante la elevación de la temperatura. Este proceso se realiza sacando
las cápsulas de los crioviales y se colocan en cajas Petri destapadas y
expuestas al aire de la campana de flujo laminar durante 5 minutos
(González-Arnao y Engelmann, 2006).
El
recultivo se lleva a cabo generalmente en medio de cultivo semisólido estándar.
Sin embargo, la composición del medio de recuperación puede ser transitoria o
modificada para eliminar los compuestos fenólicos producidos por las células
muertas mediante la adición de carbón activado, o bien para reducir el estrés
osmótico causado por la transferencia de las muestras a un medio con baja
presión osmótica, o bien para estimular la proliferación de los explantes
congelados, modificando el contenido de los reguladores de crecimiento
presentes en el medio (González-Arnao y Engelmann, 2006).
Las
condiciones ambientales también son importantes. Se ha encontrado beneficioso
para las estructuras organizadas como los meristemos, realizar la recuperación
después de la congelación en la oscuridad durante un corto periodo, para evitar
la foto-oxidación de las muestras congeladas (Benson, 1990).
En
algunos casos, es necesario extraer los explantes de las capsulas y colocarlos directamente
en el medio de cultivo para asegurar su recuperación, como en el caso de las
microesporas de semillas oleaginosas (Uragami, 1993), ápices de uva (Plessis et
a., 1993) y mora (Niino et al., 1992).
CONGELACIÓN Y DESCONGELACIÓN
Los
meristemos precultivados y deshidratados en gel de sílice se introducen en crioviales
de 2 mL para realizar el enfriamiento como se muestra en la Figura 6. Los 26 crioviales se introdujeron de manera rápida al nitrógeno líquido donde permanecieron al menos 15 min. Para la descongelación,
las cápsulas fueron sacadas de los crioviales, depositadas en una caja petri y se expusieron al flujo de
aire de la campana durante 2-3 min.
EFECTO DE LOS MÉTODOS DE
CONGELACIÓN -DESCONGELACIÓN
No se
logró sobrevivencia bajo las condiciones
de deshidratación ensayadas después de
la inmersión de las muestras al nitrógeno líquido. Esto indica, que el
contenido de humedad en los tejidos es
aún alto y que se requiere seguir profundizando en los estudios
de deshidratación hasta alcanzar una condición
en la que los tejidos sean capaces
de sobrevivir a un estrés más severo de deshidratación, con lo que se garantice haber extraído una fracción mayor
del agua congelable y se logre inhibir
la posible formación de cristales de
hielo que actualmente provoca la pérdida total de la sobrevivencia después de la congelación. Otea
alternativa podría ser, ensayar otras técnicas criobiológicas sobre la base de estos
resultados, ya que la clave del éxito radica en la deshidratación de los tejidos
antes de la Cryoconservación.
BIBLIOGRAFÍA
http://cdigital.uv.mx/bitstream/123456789/30417/1/HidalgoLezama.pdf#page=24&zoom=auto,0,619
