¿CÓMO SE DESCONGELAN LOS EXPLANTES CONSERVADOS?

¿CÓMO SE DESCONGELAN LOS EXPLANTES CONSERVADOS?

“La naturaleza está constituida de tal manera que es experimentalmente imposible determinar sus movimientos absolutos” (Albert Einstein).

Aristolochia es un género de plantas con más de 500 especies de la familia de las Aristolochiaceae (Scheper, 1998).

DESCONGELACIÓN Y RECULTIVO

Con la técnica  E/D, la descongelación se realiza generalmente a temperatura  ambiente, puesto que las muestras están lo suficientemente deshidratadas antes de la  congelación y no hay riesgo de recristalización del hielo durante la elevación de la  temperatura. Este proceso se realiza sacando las cápsulas de los crioviales y se colocan en cajas Petri destapadas y expuestas al aire de la campana de flujo laminar durante 5 minutos (González-Arnao y Engelmann, 2006).

El recultivo se lleva a cabo generalmente en medio de cultivo semisólido estándar. Sin embargo, la composición del medio de recuperación puede ser transitoria o modificada para eliminar los compuestos fenólicos producidos por las células muertas mediante la adición de carbón activado, o bien para reducir el estrés osmótico causado por la transferencia de las muestras a un medio con baja presión osmótica, o bien para estimular la proliferación de los explantes congelados, modificando el contenido de los reguladores de crecimiento presentes en el medio (González-Arnao y Engelmann, 2006).

Las condiciones ambientales también son importantes. Se ha encontrado beneficioso para las estructuras organizadas como los meristemos, realizar la recuperación después de la congelación en la oscuridad durante un corto periodo, para evitar la foto-oxidación de las muestras congeladas (Benson, 1990).

En algunos casos, es necesario extraer los explantes de las capsulas y colocarlos directamente en el medio de cultivo para asegurar su recuperación, como en el caso de las microesporas de semillas oleaginosas (Uragami, 1993), ápices de uva (Plessis et a., 1993) y mora (Niino et al., 1992).

CONGELACIÓN Y DESCONGELACIÓN

Los meristemos precultivados y deshidratados  en gel de sílice se introducen  en  crioviales de 2 mL para realizar el enfriamiento como se muestra en la Figura 6. Los 26 crioviales se introdujeron de manera rápida al nitrógeno líquido donde  permanecieron al menos  15 min. Para la descongelación, las cápsulas fueron sacadas de los crioviales, depositadas en una caja petri y se expusieron al flujo de aire de la campana durante 2-3 min.

  

EFECTO DE LOS MÉTODOS DE CONGELACIÓN -DESCONGELACIÓN

No se logró sobrevivencia  bajo las condiciones de deshidratación ensayadas después  de la inmersión de las muestras al nitrógeno líquido. Esto indica, que el contenido de humedad en los tejidos es aún alto y que  se  requiere seguir profundizando en los estudios de deshidratación  hasta alcanzar una condición  en la que  los tejidos  sean  capaces de sobrevivir a un estrés más severo de deshidratación, con lo que se  garantice haber extraído una fracción mayor del agua congelable  y se logre inhibir la  posible formación de cristales de hielo que actualmente provoca la pérdida total de la  sobrevivencia después de la congelación. Otea alternativa podría ser, ensayar  otras  técnicas criobiológicas sobre la base de estos resultados, ya que la clave del éxito radica en la deshidratación de los tejidos antes de la Cryoconservación.

BIBLIOGRAFÍA

http://cdigital.uv.mx/bitstream/123456789/30417/1/HidalgoLezama.pdf#page=24&zoom=auto,0,619