INTRODUCCIÓN

INTRODUCCIÓN

TÉCNICAS DE LA BIOLOGÍA MOLECULAR

La biología molecular es el estudio de la vida a un nivel molecular. Esta área de las ciencias corresponde concretamente a la confluencia de la Genética y Bioquímica. La biología molecular concierne principalmente al entendimiento de las interacciones de los diferentes procesos sistémicos en el interior de la célula, como son los procesos relacionados con el ADN (Acido desoxinucleico) y ARN (Acido desoxirribonucleico), la síntesis de proteínas, el metabolismo, y el cómo todas esas interacciones son reguladas para conseguir la perfección del funcionamiento de la célula. Es una ciencia tiene como objetivo fundamental permitir la comprensión de todos aquellos procesos celulares, que contribuyen a que la información genética se transmita eficientemente de unos seres a otros, y se exprese en los nuevos individuos.

 

La principal molécula estudiada por la biología molecular son los ácidos nucleicos, a estos corresponde principalmente el DNA y el ARN. El DNA en términos generales, permite la transmisión de la información hereditaria de generación en generación, y junto a ello es conocida como mentor y cerebro celular, el cual regula el número y naturaleza de cada elemento y reacción celular, lo que es determinado por la estructurada las proteínas, las que en su función de enzimas determinará la gran mayoría de las funciones celulares. En cuanto al RNA se encuentra tanto en el núcleo como en el citoplasma de las células de manera abundante, y tiene un papel más que importante en el proceso de síntesis de proteínas. Ambas moléculas en conjunto y sus funciones generan lo que conocemos como el dogma de la biología molecular que se basa en los procesos de Replicación, Transcripción, y Traducción del DNA.

Esta ciencia se encuentra en continua evolución gracias a la aparición de una serie de técnicas englobadas dentro del término genérico de Ingeniería Genética y referidas indistintamente como clonación, DNA recombinante o manipulación genética. 

Antes del desarrollo de la Ingeniería Genética no era posible aislar un gen concreto eucariótico en cantidades suficientes para su estudio molecular o el de su producto.

La extracción y purificación de ácidos nucleicos constituye la primara etapa de la mayoría de los estudios de biología molecular y de todas las técnicas de recombinación de ADN. En este caso, los métodos de extracción permiten obtener ácidos nucleicos purificados a partir de diversas fuentes para después realizar análisis específicos de modificaciones genéticas mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). La calidad y la pureza de los ácidos nucleicos son dos de los elementos más importantes en ese tipo de análisis. Si se desea obtener ácidos nucleicos muy purificados, que no contengan contaminantes inhibidores, es preciso aplicar métodos de extracción adecuados. Los contaminantes capaces de inhibir el análisis PCR se enumeran. Con objeto de evitar los falsos negativos debidos a la presencia de inhibidores de la PCR en la muestra, se recomienda vivamente efectuar un experimento de control de la inhibición de la PCR, que suele hacerse mediante PCR específica de vegetales (eucariotas o cloroplastos) o de la especie.

Dada la gran variedad de métodos de extracción y purificación de ácidos nucleicos existentes, la elección de la técnica más adecuada suele efectuarse conforme a los criterios siguientes:

1.- Ácido nucleico diana.

2.- Organismo fuente.

3.- Material inicial (tejido, hoja, semilla, material transformado, etc.).

4.- Resultados deseados (rendimiento, pureza, tiempo que requiere la purificación).

5.- Uso posterior (PCR, clonación, etiquetado, transferencia, RT-PCR, síntesis de ADNc, etc.).